Méritos extraordinários do ELISA ultrassensível com ciclagem de tio-NAD na determinação da proteína NS1 da dengue

1. Introdução

A dengue é uma doença infecciosa aguda causada peloVírus da dengueatravés da picada de um mosquito infectado da espécie Aedes (Ae. aegypti ou Ae. albopictus),com os principais sintomas como febre alta, tontura, dor de cabeça, erupção cutânea eGravedores (dor nos olhos, músculos, articulações ou ossos), etc. Esta doença é amplamente prevalente em climas tropicais e subtropicais. Estima-se que 100 a 400 milhões de pessoas sejam infectadas a cada ano, onde mais de 80% são geralmente leves e assintomáticas. No entanto, a dengue grave pode aumentar o risco de morte se não for tratada adequadamente. Assim, o diagnóstico precoce desta doença é significativo para o seu tratamento oportuno.

Digno de nota, a proteína não estrutural 1 (NS1), uma glicoproteína altamente conservada, é secretada principalmente durante a infecção deDenguevírus, que é intensamente considerado como o principal fator de patogênese daDengue. Assim, o NSI é geralmente usado como um biomarcador para a detecção precoce desta doença.

Neste estudo, um ensaio de imunoabsorção enzimática em sanduíche(ELISA)em combinação com odinucleotídeo de tio-nicotinamida adenina (tio-NAD/S-NAD)método de ciclagem (doravante denominado ELISA ultrassensível) é utilizado para detectar NSI, seguido da comparação com NAAT para confirmar sua precisão de detecção.

2. Vantagens e desvantagens dos métodos tradicionais de detecção paraDengue 

Atualmente, tAqui estão quatro métodos principais de detecçãodurante Dengue.


O isolamento e a identificação viral têm alta especificidade, mas são demorados, levando pelo menos 5 dias. O teste rápido de antígeno é o mais rápido e econômico entre os outros métodos, mas a sensibilidade e a especificidade são relativamente baixas. O teste sorológico baseado em IgM e IgG é limitado pelo número de dias de infecção, poisoO teste deve ser adiado até que o nível de anticorpos atinja um nível detectável.

Na clínica, o NAAT é frequentemente aplicado para determinarDenguepor sujeira de sua alta sensibilidade e especificidade. No entanto, esse método é caro, trabalhoso e propenso a falsa positividade, que deve ser conduzida por pessoal treinado.Para superar as desvantagens desses métodos, um novo método de detecçãoELISA ultrassensível é aplicado neste estudo.

3. Fluxo de trabalho de ELISA ultrassensível com ciclagem de tio-NAD

Um par de anticorposÉusado para capturar a proteína NS1 no ELISA sanduíche e fosfatase alcalinaÉmarcado no anticorpo secundário. Além dos anticorpos, um derivado da androsterona, 3α-hidroxiesteróide desidrogenase, tio-NAD e NADHareusado para construir o sistema de ciclagem enzimática tio-NAD. Durante a reação de ciclagem de tio-NAD, o tio-NADH se acumulou constantemente em um número triangular e pode ser medido diretamente a uma absorbância de 405 nm.

4. A comparação de ELISA ultrassensível e NAAT na detecção da proteína NS1 da dengue

No NAAT, 60 amostras são positivas para dengue e 25 são negativas para dengue. O valor do limiar de ciclagem (CT) do NAAT desses espécimes positivos para dengue variou de 12,42 a 31,41.No ELISA ultrassensível, 59 amostras são correspondentemente positivas para os resultados do NAAT, enquanto 25 amostras são completamente negativas para os resultados do NAAT.

Em comparação com o NAAT, a sensibilidade e a especificidade do ELISA ultrassensível são de 98,3% e 100%, respectivamente (Tabela 2). Das 60 amostras de pacientes positivas para dengue confirmadas pelo NAAT, apenas 1 amostra é negativa no ELISA ultrassensível. Os dados do NAAT mostraram que a amostra é um caso de infecção por DENV tipo 4 com um valor de CT de 21,59. Os resultados do ELISA ultrassensível estão em concordância quase perfeita com os resultados do NAAT, com um valor kappa de 0,972 (IC 95%: 0,917-1.0).

5. Conclusão

O método ELISA ultrassensível é fácil de executar e não requer estagiários profissionais para operar. A detecção pode ser iniciada imediatamente após o recebimento de uma pequena amostra. É particularmente adequado para a detecção precoce da doença da dengue em países de baixa renda.

Referência

Chen, Po-Kai et al. "Método de detecção avançada para a proteína NS1 da dengue usando ELISA ultrassensível com ciclagem de Thio-NAD." Vírus vol. 15,9 1894. 8 de setembro de 2023, doi:10.3390/v15091894

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