Um método científico para quantificar NMN em amostras biológicas
1. Introdução
Suplementação de mononucleotídeo de nicotinamida (NMN) para regular positivamente o nível de dinucleotídeo de nicotinamida adenina (NAD+) foi revelado como uma intervenção antienvelhecimento promissora. No entanto, ainda é um sério desafio quantificar com precisão os intermediários NAD+, NMN em particular. Este estudo tem como objetivo introduzir um novo método, metodologia LC-MS/MS mediada por isótopos duplos (dimeLC-MS/MS), para a quantificação precisa de NMN em amostras biológicas.
2. Fatores que afetam a detecção precisa de NMN
O NMN é difícil de ser detectado com precisão devido à sua vulnerabilidade à degradação enzimática, conversão no processamento de amostras, seus comportamentos complexos em diferentes condições de coluna e extração, bem como efeito de matriz.
Especificamente, o NMN tem as propriedades de alta polaridade e baixa volatilidade, que é fácil de dissolver em água, mas difícil de dissolver em solventes orgânicos. Essas propriedades restringem muito a aplicação de muitos métodos convencionais de análise quantitativa.
Bamostras iológicas comoO sangue carrega atividades significativas de CD38 e CD73 (ecto-5’-nucleotidase), ambos os quais poderiam usar NMN como substrato.
O comportamento do NMN na coluna é muito complexo, provavelmente devido à natureza bipartida de suas cargas, de modo que diferenças sutis nas condições de extração e coluna afetam significativamente a detecção confiável e precisa do NMN.
3. Estratégias de enfrentamento de centavoLC-MS/MSreduzir o impacto dos fatores de impacto
Para evitar a interferência dos fatores acima mencionados, é aplicada uma coluna protótipo NMN-2. Esta coluna contém partículas de sílica de alta pureza à base de C18 que são mais capazes de ligar compostos hidrofílicos do que partículas de carbono, melhorando a capacidade de separação.
O ácido perclórico (PCA) é empregado, pois pode extrair com eficiência NAD + e NMN de amostras biológicas, como plasma, com perdas mínimas.
Para ajustar os efeitos da matriz, uma quantidade fixa (1 μM) de cada composto isotópico é adicionada às amostras biológicas antes da extração do PCA.
4. A vantagemsde dimeLC-MS/MS
Os padrões NMN isotópicos duplos, NMN (M + 14) e NMN (M + 5), na metodologia orientada por LC-MS/MS, podem rastrear com precisão o destino do NMN durante o processamento da amostra, o que aumenta significativamente a precisão e a confiabilidade da medição de NMN em amostras biológicas. Além disso, dimeLC-MS/MS pode avaliar a eficiência de extração e as concentrações absolutas de NMN em diferentes tipos de amostras biológicas.
5. Conclusão
ÉsimoÉnovo LC-MS/MS-com padrões NMN isotópicos duplos pode medir NMN com precisão e confiabilidade em amostras biológicas.Pode ser usado para estudos futuros sobre a ingestão de NMN.
6. Referência
Unno, Junya et al. "Quantificação absoluta de mononucleotídeo de nicotinamida em amostras biológicas por cromatografia líquida mediada por isótopos duplos-espectrometria de massa em tandem (dimeLC-MS / MS)." npj envelhecimento vol. 10,1 2. 2 de janeiro de 2024, doi:10.1038/s41514-023-00133-1
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