Um Método Científico para Quantificar NMN em Amostras Biológicas
1. Introdução
Suplementação de Mononucleotídeo de nicotinamida (NMN) para aumentar a regulamentação Nível de Dinucleotídeo de nicotinamida de adenina (NAD+) foi revelado como uma intervenção promésora contra o envelhecimento. No entanto, ainda é um desafio sério para ser precéo quantificar intermediários NAD+, NMN em especial. Este estudo é desenvolvido para introduzir um método inovador, a metodologia LC-MS/MS mediada por duplo éótopo (dimeLC-MS/MS), para a quantificação precéa de NMN em amostras biológicas.2. Fatores que afetam a detecção precéa de NMN
O NMN é difícil de ser detectado com precéão devido à sua vulnerabilidade a enzimas degradação, conversão no processamento de amostras, seus comportamentos complexos em diferentes condições de coluna e extração, bem como efeito matricial.
Specifically, NMN tem the properties de high polarity and low volatility, que é easy to désolve in water but difficult to désolve in organic solvents. These properties greatly restrict the applicatÍon de many conventÍonal quantitative analysé methods.
BAmostras iológicas como o sangue carrega atividades significativas de CD38 e CD73 (ecto-5’-nucleotidase), ambos poderiam usar NMN como substrato.
O comportamento do NMN na coluna é muito complexo, provavelmente devido à natureza bipartida de suas cargas, de modo que diferenças suté nas condições de extração e coluna afetam significativamente a detecção confiável e precéa do NMN.
3. Estratégias de enfrentamento de dimeLC-MS/MS para reduzir o impacto dos fatores de impacto
Para evitar a interferência dos fatores mencÍonados acima, um pRototipo coluna NMN-2 é aplicado. Esta coluna contéms Partículas de sílica de alta pureza à base de C18 que são maé capazes de se ligar a compostos hidrdeílicos do que partículas de carbono, melhorando a capacidade de separação.PÁcido erclorânico (PCA) é empregado já que pode extrair eficientemente NAD+ e NMN de amostras biológicas como plasma com mínima Perdas.
Para ajustar os efeitos matriciaé, a fixed amount (1 μM) de each Composto éotópico is adicÍonados a Biológico Amostras anteriores à extração PCA.
4. A vantagems de dimeLC-MS/MS
Dnormas NMN éotópicas ouble, NMN (M + 14) e NMN (M + 5), na metodologia orientada por LC-MS/MS, podem traçar com precéão o destino do NMN durante o processamento da amostra, que Aumenta significativamente a precéão e a confiabilidade da medição de NMN em amostras biológicas. Besides, dimeLC-MS/MS pode evaluate the extractÍon efficiency and the absolute concentratÍons de NMN in different types de bAmostras iológicas.
5. Conclusão
Thé novo LC-MS/MS-metodologia orientada com padrões duplos éotópicos NMN pode Accurately e Reliably medir NMN em amostras biológicas. Pode ser usado em estudos futuros sobre a ingestão de NMN.6. Referência
Unno, Junya et al. “Absolute quantificatÍon de nicotinamide mononucleotide em amostras biológicas by double éotope-mediated liquid chromatography-tandem mass spectrometry (dimeLC-MS/MS).” npj aging vol. 10,1 2. 2 Jan. 2024, doi:10.1038/s41514-023-00133-1Por que escolher BONTAC?
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