1. Introdução

Suplementação demononucleotídeo de nicotinamida (NMN)para upregulate oníveldenicotinamida adenina dinucleotídeo (NAD+)revelou-se uma intervenção antienvelhecimento promissora. No entanto, ainda éum sério desafio para a precisãoquantificar os intermediários NAD+, NMN em particular. Este estudo tem como objetivo introduzir um novo método, a metodologia LC-MS/MS mediada por isótopos duplos (dimeLC-MS/MS), para a quantificação precisa deNMN em amostras biológicas.

2. Fatores que afetam a detecção precisa de NMN

NMN é difícil de ser detectado com precisão devido à sua vulnerabilidade enzimáticadegradação, conversão no processamento de amostras, seus comportamentos complexos em diferentes condições de coluna e extração, bem como efeito matriz.


Especificamente, o NMN tem as propriedades de alta polaridade e baixa volatilidade, que é fácil de dissolver em água, mas difícil de dissolver em solventes orgânicos. Essas propriedades restringem muito a aplicação de muitos métodos convencionais de análise quantitativa.

Bamostras iológicascomoo sangue carrega atividades significativas de CD38 e CD73 (ecto-5'-nucleotidase), ambos os quais poderiam usar NMN como substrato.

O comportamento do NMN na coluna é muito complexo, provavelmente devido à natureza bipartida de suas cargas, de modo que diferenças sutis nas condições de extração e coluna afetam significativamente a detecção confiável e precisa do NMN.

3. Estratégias de enfrentamento deDimeLC-MS/MSreduzir o impacto dos fatores de impacto

Para evitar a interferência dos fatores supracitados, considerou-se pRototipocolunaNMN-2é aplicada. Esta colunacontersPartículas de sílica de alta pureza à base de C18que são mais capazes de se ligar a compostos hidrofílicos do que partículas de carbono, melhorando a capacidade de separação.

Pácido erclorico (PCA)é empregado, uma vez que podeextrair NAD+ com eficiência e NMN de amostras biológicas, como plasma com mínimo Perdas.

Para ajustar os efeitos de matriz,ummontante fixo (1 μM) de cada composto isotópicoeus adicionado abiológicoamostras antes da extração de PCA.

4. A vantagemsde dimeLC-MS/MS

Dpadrões NMN isotópicos ouble, NMN (M + 14) e NMN (M + 5), na metodologia orientada por LC-MS/MS, podem traçar com precisão o destino do NMN durante o processamento da amostraqualaumenta significativamente a precisão e a confiabilidade da medição de NMN em amostras biológicas. Além disso, dimeLC-MS/MS pode avaliar a eficiência de extração e as concentrações absolutas de NMN em diferentes tipos de amostras biológicas.

5. Conclusão

ÉsimoÉnova LC-MS/MS-metodologia orientada com padrões NMN isotópicos duplos poderAccuraTélye reliabLymedir NMN em amostras biológicas. Pode ser utilizado para estudos futuros sobre a ingestão de NMN.

6. Referência

"Quantificação absoluta de mononucleotídeo de nicotinamida em amostras biológicas por cromatografia líquida mediada por isótopos duplos-espectrometria de massas em tandem (dimeLC-MS/MS)." npj envelhecimento vol.10,1 2. 2 de janeiro de 2024, DOI:10.1038/s41514-023-00133-1

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