Detecção de Dengue NS1 utilizando ELISA Ultrassensível com Ciclagem Thio-NAD

1. Introdução

A dengue é uma doença infecciosa aguda causada pelaVírus da dengueatravés da picada de uma espécie de mosquito Aedes infectado (Ae. aegypti ou Ae. albopictus),com os principais sintomas como febre alta, tontura, dor de cabeça, erupção cutânea eGrave dores (oculares, musculares, articulares ou ósseas), etc. Esta doença é amplamente prevalente em climas tropicais e subtropicais. Estima-se que 100 a 400 milhões de pessoas sejam infectadas a cada ano, onde mais de 80% são geralmente leves e assintomáticas. No entanto, a dengue grave pode aumentar o risco de morte se não tratada adequadamente. Assim, o diagnóstico precoce dessa doença é significativo para o seu tratamento oportuno.

Notavelmente, a proteína não-estrutural 1 (NS1), uma glicoproteína altamente conservada, é secretada principalmente durante a infecção deDenguevírus, que é intensamente considerado como o principal fator de patogênese deDengue. Assim, o NSI é geralmente usado como um biomarcador para a detecção precoce dessa doença.

Neste estudo, um ensaio imunoenzimático sanduíche(ELISA) em combinação com odinucleotídeo tio nicotinamida adenina (tio-NAD/S-NAD)método de ciclismo ( doravante denominado ELISA ultrassensível ) é utilizado para detectar o NSI, seguido da comparação com o NAAT para confirmar sua acurácia de detecção.

2. Vantagens e desvantagens dos métodos tradicionais de detecção paraDengue 

Actualmente,Aqui estão quatro métodos de detecção principaisdurante Dengue.


Isolamento viral e a identificação têm alta especificidade, mas são demoradas, levando pelo menos 5 dias. O antígeno rápido teste é o mais rápido e custo-eficiente entre os outros métodos, mas a sensibilidade e a especificidade é relativamente baixa. O teste sorológico baseado em IgM e IgG é limitado por o número de dias de infecção, comooteste deve ser adiado até o nível de anticorpos sobe para um nível detectável.

Na clínica, o NAAT é frequentemente aplicado para determinarDengue pela sujeira de sua alta sensibilidade e especificidade. No entanto, esse método é caro, trabalhoso e propenso a falsas positividades, que devem ser conduzidas por pessoal treinado.Para superar as desvantagens desses métodos, um novo método de detecçãoELISA ultrassensível é aplicado neste estudo.

3. Fluxo de trabalho de ELISA ultrassensível com ciclagem tio-NAD

Um par de anticorposÉusado para capturar a proteína NS1 no ELISA sanduíche e fosfatase alcalinaÉmarcados no anticorpo secundário. Além dos anticorpos, um derivado da androsterona, 3α-hidroxiesteróide desidrogenase, tio-NAD e NADHareusado para construir o sistema de ciclagem enzimática tio-NAD. Durante a reação de ciclagem de tio-NAD, o tio-NADH acumulou-se constantemente de forma numérica triangular e pôde ser medido diretamente a uma absorbância de 405 nm.

4. Comparação entre ELISA ultrassensível e NAAT na detecção da proteína NS1 da dengue

No NAAT, 60 espécimes são positivos para dengue e 25 são negativos para dengue. O valor do limiar de ciclagem (PC) do NAAT dos espécimes positivos para dengue variou de 12,42 a 31,41.No ELISA ultrassensível, 59 espécimes são correspondentemente positivos aos resultados do NAAT, enquanto 25 espécimes são completamente negativos aos resultados do NAAT.

Em comparação com o NAAT, a sensibilidade e a especificidade do ELISA ultrassensível são de 98,3% e 100%, respectivamente (Tabela 2). De 60 espécimes de pacientes positivos para dengue confirmados por NAAT, apenas 1 espécime é negativo no ELISA ultrassensível. Os dados do NAAT mostraram que o espécime é um caso de infecção por DENV tipo 4 com um valor de TC de 21,59. Os resultados do ELISA ultrassensível estão em concordância quase perfeita com os resultados do NAAT, com um valor kappa de 0,972 (IC 95%: 0,917-1.0).

5. Conclusão

UO método ELISA ltrasensitive é fácil de executar e não requer estagiários profissionais para operar. TA detecção pode ser iniciada imediatamente após o recebimento de uma pequena amostra.É particularmente adequado para a detecção precoce deDenguedoença emPaíses de baixa renda.

Referência

"Método avançado de detecção da proteína NS1 da dengue usando ELISA ultrassensível com ciclagem de tio-NAD." Vírus vol.15,9 1894. 8 de setembro de 2023, doi:10.3390/v15091894

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