Méritos Extraordinários do ELISA Ultrassensível com Ciclo Tio-NAD na Determinação da Proteína NS1 da Dengue
1. Introdução
A dengue é uma doença infecciosa aguda causada peloVírus da dengue através da picada de uma espécie infectada de mosquito Aedes (Ae. aegypti ou Ae. albopictus),com os principais sintomas como febre alta, tontura, dor de cabeça, erupção cutânea esevero Dores (dor nos olhos, músculos, articulações ou ossos), etc. Essa doença é amplamente prevalente em climas tropicais e subtropicais. Estima-se que de 100 a 400 milhões de pessoas sejam infectadas a cada ano, sendo que mais de 80% geralmente são leves e assintomáticas. No entanto, a dengue severa pode aumentar o risco de morte se não for tratada adequadamente. Assim, o diagnóstico precoce dessa doença é significativo para seu tratamento oportuno.Vale destacar que a proteína não estrutural 1 (NS1), uma glicoproteína altamente conservada, é secretada principalmente durante a infecção deDenguevírus, que é intensamente considerado como o principal fator de patogênese deFebre da dengue. Por isso, o INNE é geralmente usado como biomarcador para a detecção precoce dessa doença.
Neste estudo, um ensaio imunossorvente ligado a enzimas sanduíche (ELISA) em combinação com oTionicotinamida Adenina Dinucleotídeo (TIO-NAD/S-NAD)Método de ciclagem (doravante denominado ELISA ultrassensível) é utilizado para detectar o INE, seguido pela comparação com o NAAT para confirmar sua precisão de detecção.
2. Vantagens e desvantagens dos métodos tradicionais de detecção paraFebre da dengue
Atualmente, tAqui estão quatro principais métodos de detecçãopara Dengue.
Isolamento viral e a identificação têm alta especificidade, mas consomem tempo, levando pelo menos 5 dias. O Antígeno Rápido O teste é o mais rápido e econômico entre os outros métodos, mas a sensibilidade e especificidade são relativamente baixas. O teste sorológico baseado em IgM e IgG é limitado por o número de dias de infecção, comooO teste deve ser adiado até o nível de anticorpos sobe a um nível detectável.
Em clínica, o NAAT é frequentemente aplicado para determinarFebre da dengue pela sujeira de sua alta sensibilidade e especificidade. No entanto, esse método é caro, trabalhoso e propenso a falsos positivos, que deve ser aplicado por profissionais treinados.Para superar as desvantagens desses métodos, um novo método de detecção foi criadoELISA ultrasensível é Aplicado neste estudo.
3. Fluxo de trabalho do ELISA ultrassensível com ciclo thio-NAD
Um par de anticorposé usada para capturar a proteína NS1 no sanduíche ELISA e fosfatase alcalinaé marcado no anticorpo secundário. Além dos anticorpos, há um derivado da androsterona, 3α-hidroxisteroide desidrogenase, tio-NAD e NADHsão Usado para construir o sistema de ciclagem enzimática tio-NAD. Durante a reação de ciclo tio-NAD, a tio-NADH acumulava-se constantemente em forma triangular e podia ser medida diretamente com uma absorção de 405 nm.
4. A comparação entre ELISA ultrassensível e NAAT na detecção da Proteína NS1 da Dengue
No NAAT, 60 amostras são positivas para dengue e 25 são negativas para dengue. O valor do limiar de ciclo (CT) do NAAT desses estípicos positivos para dengue variou de 12,42 a 31,41.No ELISA ultrasensível, 59 amostras são correspondentes positivas aos resultados do NAAT, enquanto 25 amostras são completamente negativas aos resultados do NAAT.Comparado ao NAAT, a sensibilidade e especificidade do ELISA ultrasensível são de 98,3% e 100%, respectivamente (Tabela 2). De 60 amostras de pacientes positivas para dengue confirmadas por NAAT, apenas 1 amostra é negativa no ELISA ultrasensível. Os dados da NAAT mostraram que a amostra é um caso de infecção tipo 4 por DENV com valor de TC de 21,59. Os resultados do ELISA ultrassensível estão quase em perfeita concordância com os resultados do NAAT, com um valor de kappa de 0,972 (IC 95%: 0,917-1.0).
5. Conclusão
UO método ELISA Itrasensitive é fácil de executar e não requer trainees profissionais para operar. TA detecção de HE pode ser iniciada imediatamente após receber uma pequena amostra. É particularmente adequado para a detecção precoce deDenguedoença em Países de baixa renda.Referência
Chen, Po-Kai et al. "Método Avançado de Detecção para Proteína NS1 da Dengue usando ELISA ultrasensível com ciclo de Tio-NAD." Vírus vol. 15,9 1894. 8 set. 2023, doi:10.3390/v15091894Vantagens do produto e características deBONTAC Thio-NAD/S-NAD
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